摘要：該研究主要通過黑曲霉發(fā)酵和酶解兩步法處理菜粕，利用發(fā)酵過程中產(chǎn)生的多種酶進(jìn)一步降解菜粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子及提高小肽含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菜粕經(jīng)黑曲霉固態(tài)發(fā)酵后，硫苷含量從31.38μmol/g降低至16.93μmol/g，植酸含量從34.45mg/g降低至19.38mg/g;再經(jīng)酶解后，硫苷和植酸含量分別降低至 11.31μmol/g和1mg/g以下。與單步發(fā)酵法相比較，硫苷和植酸含量分別降低了33.20%和96.18%。經(jīng)發(fā)酵酶解條件優(yōu)化后，小肽含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))達(dá)到21.19%，相比于空白對照提高了673.36%。以上結(jié)果表明，經(jīng)菌酶協(xié)同處理菜粕后，相比單步發(fā)酵，菜粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子被進(jìn)一步降解，營養(yǎng)物質(zhì)得到有效的提高，對提高菜粕應(yīng)用價(jià)值具有重要意義。

菜粕是菜籽榨油后的副產(chǎn)物，其中粗蛋白含量為35%~40%，與豆粕蛋白相比蛋氨酸和胱氨酸含量更高，且含有豐富的金屬元素，如鐵、錳、銅、鈣、磷、硒等，是一種價(jià)廉易得的優(yōu)質(zhì)植物蛋白資源。但菜粕中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，如硫苷、植酸、芥酸和單寧酸等，限制了其在食品、飼料行業(yè)中的應(yīng)用。其中硫苷為主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子，分解后會生成惡唑烷硫酮、異硫氰酸酯、腈等有毒物質(zhì)，這些物質(zhì)對動(dòng)物甲狀腺、肝、腎都會產(chǎn)生毒害作用。植酸主要能與蛋白質(zhì)、銅、鋅、鈣等營養(yǎng)物質(zhì)結(jié)合形成難以消化的絡(luò)合物，降低菜粕的營養(yǎng)價(jià)值。另一方面，由于菜粕蛋白中小肽含量低，相比于豆粕、魚粉蛋白更難被消化。因此，降低菜粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子硫苷、植酸含量并提高小肽含量，對提高菜粕的營養(yǎng)價(jià)值，解決蛋白質(zhì)原料供應(yīng)緊缺的問題具有重要意義。

為了改善菜籽粕的營養(yǎng)價(jià)值，國內(nèi)外許多學(xué)者對菜粕的脫毒方法進(jìn)行了大量研究，包括物理脫毒法、化學(xué)脫毒法、微生物發(fā)酵法和遺傳育種法。微生物固態(tài)發(fā)酵法經(jīng)濟(jì)高效、重現(xiàn)性好，近年來常被用于菜粕脫毒、提取菜籽抗氧化肽等。CROAT等利用正己烷預(yù)處理菜粕后，通過里氏木霉30℃發(fā)酵168h后將菜粕中硫苷降至0.4μmol/g。但存在有機(jī)試劑殘留，發(fā)酵時(shí)間長等問題。MAHAJAN等通過添加純酶制劑降解植酸、硫苷，其降解率分別達(dá)到71%、60%。但通過添加純酶制劑處理菜粕降解抗?fàn)I養(yǎng)因子，一方面降低了酶和底物的耦合度使得酶解效率低下，另一方面也增加了處理成本。

目前大部分研究側(cè)重于通過微生物一步發(fā)酵法降解抗?fàn)I養(yǎng)因子，但未考察過通過發(fā)酵后結(jié)合酶解的方式進(jìn)一步降解菜粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高營養(yǎng)物質(zhì)。由于黑曲霉具有產(chǎn)酶系較全且安全性高的特點(diǎn)，并符合農(nóng)業(yè)部頒布的安全發(fā)酵菌株要求，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇一株能降解硫苷、植酸的黑曲霉發(fā)酵菜粕，發(fā)酵結(jié)束后利用黑曲霉在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的各種酶進(jìn)一步酶解發(fā)酵后的菜粕，通過發(fā)酵、酶解兩步法降低菜粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子硫苷和植酸含量，提高菜粕中小肽含量。

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種

黑曲霉，購買于中國工業(yè)菌種保藏中心(CICC)。

1.1.2 原料

菜籽粕(水分含量10.57%)、麩皮(水分含量9.31%)，樂山某科技有限公司。

1.1.3 培養(yǎng)基

保藏培養(yǎng)基:察氏瓊脂培養(yǎng)基(質(zhì)量分?jǐn)?shù))

蔗糖3%;

NaNO3 0.3%;

K2HPO4 0.1%;

MgSO4·7H2O 0.05%;

KCl 0.05%;

FeSO4 0.001%;

瓊脂1.5%~2%;

121℃滅菌20min。

黑曲霉麩皮種子培養(yǎng)基:麩皮∶水=2∶1(g∶mL)，自然pH;混勻取30g裝500mL三角瓶，121℃滅菌15min。

發(fā)酵培養(yǎng)基:菜粕(絕干)∶麩皮(絕干)∶水=7∶3∶15(g∶g∶mL)，自然pH;混勻取60g裝于500mL三角瓶，121℃滅菌15min。

1.2 儀器設(shè)備

T-114 型分析天平;

T6 紫外-可見分光光度計(jì);

QYC-2102C 型恒溫培養(yǎng)搖床;

MF 80BSH-2 型霉菌培養(yǎng)箱;

LS-75HD 立式高壓蒸汽滅菌器;

SW-CJ-2F 型超級潔凈工作臺;

K9840自動(dòng)凱氏定氮儀。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 種子制備

勾取5~7環(huán)保藏的黑曲霉接種于種子培養(yǎng)基中，混勻，30℃恒溫培養(yǎng)72h。

1.3.2 固態(tài)發(fā)酵

將黑曲霉麩皮種子以5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻，30℃恒溫培養(yǎng);發(fā)酵一定時(shí)間后取30g發(fā)酵菜粕于70℃烘干至恒重，粉碎過40目篩網(wǎng)測定指標(biāo)。

1.3.3 酶解

取固態(tài)發(fā)酵結(jié)束后的30g發(fā)酵菜粕裝入自封袋，45℃密閉恒溫酶解24h;之后將菜粕于70℃烘干至恒重，粉碎過40目篩網(wǎng)測定指標(biāo)。

1.3.4 發(fā)酵、酶解時(shí)間對硫苷、植酸含量的影響

固態(tài)發(fā)酵時(shí)間:分別考察發(fā)酵一定時(shí)間(12、24、36、48、60、72h)和發(fā)酵相應(yīng)時(shí)間并酶解24h后硫苷、植酸含量的變化情況。酶解時(shí)間:考察經(jīng)一定時(shí)間發(fā)酵并經(jīng)過不同時(shí)間(0、6、12、18、24、30、36h)酶解后硫苷、植酸含量的變化情況。

1.3.5 底物組成、表面活性劑、初始發(fā)酵水分對硫苷、小肽含量及產(chǎn)酶的影響

底物組成:考察發(fā)酵底物中麩皮與菜粕的比例(0∶10、1∶9、2∶8、3∶7、4∶6)對發(fā)酵后產(chǎn)酶及酶解后硫苷、小肽含量的影響。

表面活性劑:考察含水混合發(fā)酵底物中不同吐溫80添加量(質(zhì)量分?jǐn)?shù)0%、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%)對發(fā)酵后產(chǎn)酶及酶解后硫苷、小肽含量的影響。

初始發(fā)酵水分:考察不同初始發(fā)酵水分(51%、55%、59%、63%、67%、71%)對發(fā)酵后產(chǎn)酶及酶解后硫苷、小肽含量的影響。

1.3.6 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 22.0進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan檢驗(yàn)法進(jìn)行顯著性多重比較，試驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，以P＜0.05作為差異性顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2.結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵時(shí)間對硫苷、植酸含量變化的影響

如表1所示，經(jīng)過酶解后，硫苷，植酸含量相比于單步固態(tài)發(fā)酵明顯降低，且發(fā)酵時(shí)間對降解硫苷、植酸的影響十分明顯。發(fā)酵前36h，硫苷、植酸含量基本不變，發(fā)酵至48h時(shí)硫苷含量降至最低;當(dāng)發(fā)酵時(shí)間超過48h，植酸含量隨發(fā)酵時(shí)間的增加而下降，但硫苷含量隨發(fā)酵時(shí)間增加。將經(jīng)過各時(shí)間發(fā)酵后的菜粕進(jìn)一步酶解，相比于單步發(fā)酵，除發(fā)酵12h外，硫苷、植酸含量均明顯降低。發(fā)酵48h后繼續(xù)酶解24h，硫苷含量降至最低，相比于固態(tài)發(fā)酵降低了30.51%，植酸含量降解至1mg/g以下。

發(fā)酵前36h，黑曲霉產(chǎn)生降解硫苷、植酸的酶量少，經(jīng)酶解后只有少量硫苷、植酸被降解;發(fā)酵至36～48h，黑曲霉大量分泌降解硫苷、植酸的酶，經(jīng)酶解后硫苷、植酸均降至最低水平;發(fā)酵60～70h后酶解，硫苷含量相比于發(fā)酵48h后酶解顯著增加(P＜0.05)。到發(fā)酵后期，碳水化合物被大量消耗，蛋白質(zhì)成分富集，也可能導(dǎo)致硫苷含量相對增加。發(fā)酵48h后酶解的硫苷、植酸含量均處于最低水平，因此選擇48h為最佳發(fā)酵時(shí)間。

2.2 酶解時(shí)間對硫苷植酸含量變化的影響

將發(fā)酵的菜粕繼續(xù)酶解后，硫苷和植酸進(jìn)一步被降解，結(jié)果如表2所示。經(jīng)過6 h酶解后，相比于黑曲霉單獨(dú)發(fā)酵48h，植酸含量降低了69.88%;酶解12h后，植酸含量從1.40%降低至0.1%以下，王曉東等使用黑曲霉單步固態(tài)發(fā)酵菜粕將植酸從2.81%降低至0.63%，本研究結(jié)果優(yōu)于王曉東等的研究結(jié)果。酶解前12h，硫苷降解速率較快，12h后降解速率相對減慢。可能是由于12h后，可降解的底物濃度減少且45℃保溫時(shí)間過長使相關(guān)酶酶活下降，從而導(dǎo)致硫苷降解速率下降。當(dāng)經(jīng)過24h酶解后，硫苷含量降低至12.13μmol/g，且不隨酶解時(shí)間增加而變化(P＞0.05)。

發(fā)酵過程中，黑曲霉產(chǎn)生的植酸酶可能受到溫度及底物平衡等條件限制導(dǎo)致植酸降解效果不好。當(dāng)酶解溫度升高時(shí)，植酸酶分解植酸的能力也有較顯著的提高，且植酸的降解不受黑曲霉生長代謝影響，因而使得大量植酸易在短時(shí)間內(nèi)被分解。與降解植酸不同，可能在黑曲霉固態(tài)發(fā)酵過程中產(chǎn)生的分解硫苷的酶類有限，因此在酶解過程中不能將硫苷完全降解。再經(jīng)過24h酶解后硫苷和植酸含量均不再發(fā)生變化，因而選擇酶解24h為最佳酶解時(shí)間。由于經(jīng)酶解后，植酸幾乎完全降解，因此后續(xù)研究主要通過優(yōu)化菌酶協(xié)同條件進(jìn)一步降解硫苷，同時(shí)提高小肽含量。

2.3 底物組成對降解硫苷提高小肽含量的影響

麩皮作為一種良好的碳源及營養(yǎng)物質(zhì)，適量混入菜粕中能使底物變得疏松透氣，有利于黑曲霉在發(fā)酵過程中生長產(chǎn)酶。如圖1-a所示，麩皮∶菜粕=2∶8和3∶7時(shí)，黑曲霉發(fā)酵酶解后硫苷含量差異不顯著(P＞0.05)，且當(dāng)麩皮∶菜粕=3∶7時(shí)，菜粕中的小肽含量最高(P＜0.05)。如圖1-b所示，麩皮∶菜粕=3∶7時(shí)，黑曲霉發(fā)酵后蛋白酶活最高，因此麩皮∶菜粕=3∶7可能是黑曲霉生長產(chǎn)酶最適碳氮比。因?yàn)辂熎ぁ貌似?3∶7時(shí)黑曲霉產(chǎn)蛋白酶活最高，所以酶解后小肽含量也最高。當(dāng)麩皮比例超過底物的40%后，可能因?yàn)辂熎さ奶砑恿吭龃笫沟冒l(fā)酵底物中硫苷及可降解的大分子蛋白質(zhì)含量相對減少，導(dǎo)致硫苷及小肽含量均呈現(xiàn)下降趨勢。綜上，麩皮∶菜粕=3∶7有利于降解硫苷及提高小肽含量和產(chǎn)酶量，因此確定麩皮與菜粕的比例為3∶7。

2.4. 添加表面活性劑對降解硫苷，提高小肽含量的影響

在菜粕與麩皮的混合底物中加入適量的吐溫80有利于提高蛋白酶酶活和小肽含量，結(jié)果如圖2-a所示。當(dāng)在麩皮菜粕混合底物中添加0.05%的吐溫80進(jìn)行發(fā)酵酶解后，小肽含量明顯增加，相比于未添加吐溫80，小肽含量提高了42.66%，但硫苷含量無明顯差異(P＞0.05)，可能由于菜粕中剩余的硫苷種類無法被此株黑曲霉產(chǎn)生的酶分解，因此硫苷含量變化不大。圖2-b結(jié)果表明，小肽含量變化與蛋白酶活變化趨勢相似。黑曲霉在含有0.05%～0.2%吐溫80的混合底物發(fā)酵后，酸性蛋白酶顯著提高，再經(jīng)酶解后，菜粕中大分子蛋白質(zhì)進(jìn)一步被分解為小分子肽，因此小肽含量顯著提高。由于添加0.05%～0.2%的吐溫80對小肽及硫苷含量無顯著影響(P＞0.05)，因此確定吐溫80最適添加量為0.05%。

2.5 初始發(fā)酵水分對降解硫苷提高小肽含量的影響

如圖3-a所示，當(dāng)初始發(fā)酵水分低于67%時(shí)，小肽含量隨水分增加而增加，當(dāng)水分超過67%時(shí)，小肽含量明顯下降(P＜0.05)。初始水分在55%～71%，經(jīng)發(fā)酵酶解后，硫苷含量無明顯變化(P＞0.05)。圖3-b結(jié)果表明，初始水分的變化對蛋白酶活的影響不顯著(P＞0.05)，且酶解后，小肽含量的變化與蛋白酶活的變化趨勢不同。根據(jù)WANG等報(bào)道，菜粕中的蛋白質(zhì)被纖維素形成的結(jié)構(gòu)所包裹，在酶解過程中，小肽的產(chǎn)生可能也受纖維素酶影響。因此當(dāng)水分過高時(shí)，纖維素酶活力下降(圖3-b)，導(dǎo)致酶解后小肽含量下降。雖然黑曲霉于67%的初始水分發(fā)酵酶解后小肽含量最高，但由于水分過高，底物結(jié)團(tuán)嚴(yán)重，且易污染雜菌，不利于擴(kuò)大生產(chǎn)，因此確定最佳的初始發(fā)酵水分為59%～63%，為方便后續(xù)試驗(yàn)，確定最佳初始發(fā)酵水分為60%。

2.6 滅菌和不滅菌對發(fā)酵酶解后營養(yǎng)成分和抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的影響

表3結(jié)果表明，黑曲霉在滅菌與不滅菌的菜粕麩皮混合培養(yǎng)基(初始發(fā)酵水分 60%、吐溫80添加量0.05%)中發(fā)酵酶解后，除小肽含量外，硫苷、植酸、粗蛋白含量均無明顯差異(P＞0.05)。同時(shí)結(jié)果表明，未滅菌發(fā)酵對硫苷、植酸的降解及小肽含量的提高效果均優(yōu)于滅菌后發(fā)酵，推測由于滅菌后導(dǎo)致培養(yǎng)基中部分營養(yǎng)成分流失，使得黑曲霉發(fā)酵效果變差。最終經(jīng)未滅菌的麩皮菜粕混合培養(yǎng)基發(fā)酵酶解后，硫苷含量從31.38μmol/g降解為11.31μmol/g，植酸含量從34.45mg/g降低至1mg/g以下，小肽含量提高至21.19%，占粗蛋白含量的49.92%。

3.結(jié)論

通過對發(fā)酵、酶解時(shí)間，發(fā)酵酶解、產(chǎn)酶條件優(yōu)化后，確定了最優(yōu)固態(tài)發(fā)酵時(shí)間、酶解時(shí)間分別為48h、24h，菜粕與麩皮比例、吐溫80添加量、初始發(fā)酵水分分別為7∶3、0.05%、60%。與單步固態(tài)發(fā)酵相比，經(jīng)菌酶協(xié)同處理的菜粕，硫苷、植酸含量分別降低了33.20%、96.18%;與空白對照相比，硫苷、植酸含量分別降低了63.96%、97%以上;同時(shí)，菜粕中小肽含量提高至21.19%，相比于空白和單步發(fā)酵分別提高了74.98%和673.36%。綜上，菌酶協(xié)同處理菜粕后，有效降低了菜粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子硫苷、植酸含量，大幅提高了小肽含量，對擴(kuò)大菜粕蛋白的使用具有重要意義。

實(shí)戰(zhàn)操作技術(shù)——棉菜籽餅脫毒變身優(yōu)質(zhì)飼料替代豆粕操作新技術(shù)

當(dāng)前豆粕價(jià)格很高有些地方貨源緊缺，而棉菜籽餅（棉籽粕、菜籽粕）價(jià)格相對便宜，棉菜籽餅是棉子、油菜籽榨油后剩下的餅狀殘?jiān)?，蛋白質(zhì)含量較高，含有各種氨基酸成分。但由于棉菜籽餅中含有植酸、芥子堿等物質(zhì)，這些物質(zhì)含有一定的毒性，還會影響動(dòng)物的消化吸收，不能大量使用，因此不建議直接飼喂給動(dòng)物！

現(xiàn)在通過微生物飼料發(fā)酵劑的除毒脫毒技術(shù)，可以成功將菜籽餅變?yōu)閮?yōu)質(zhì)添加飼料，直接按照1公斤發(fā)酵的棉菜籽餅（發(fā)酵前的重量）代替約0.85公斤豆粕進(jìn)行使用。飼料發(fā)酵劑中的有益微生物，在發(fā)酵過程中分泌的代謝產(chǎn)物，可將棉菜籽餅中的毒性物質(zhì)等有效分解。

豆粕、菜粕、棉粕成分對比

1.豆粕是一種高蛋白原料，無需脫毒即可用作飼料。其中蛋白質(zhì)含量為40%-48%，賴氨酸含量為2.5%-3.0%，色氨酸含量為0.6%-0.7%，蛋氨酸含量為0.5%-0.7%。2020年11月12日報(bào)價(jià)每噸在3500元左右。

2.菜粕的粗蛋白含量在34%-38%之間，特點(diǎn)是蛋氨酸含量高（僅次于芝麻餅、粕），賴氨酸含量亦高。而精氨酸含量低，是餅、粕飼料中含量最低的。菜籽粕的有效能值偏低（淀粉含量低、菜籽殼難以消化利用）。礦物質(zhì)中，鈣和磷的含量均高，硒和錳的含量亦高。特別是硒的含量是常用植物飼料中最高的。2020年11月12日報(bào)價(jià)每噸在2900元左右。

3.棉粕蛋白質(zhì)含量一般為44.32%，僅次于豆粕的蛋白質(zhì)含量48%，而高于菜籽粕的蛋白質(zhì)含量36.04%。精氨酸含量高達(dá)3.6%-3.8%，而賴氨酸含量僅有1.3%-l.5%，只有豆粕的一半。2020年11月12日報(bào)價(jià)每噸在3000元左右。

是否需要脫毒處理

1.豆粕無需經(jīng)過脫毒即可用作飼料。而且豆粕中富含蛋白質(zhì)和多種氨基酸，在不需要額外加入動(dòng)物性蛋白的情況下，僅豆粕中含有的蛋白質(zhì)和氨基酸足以平衡家禽和豬的食譜，促進(jìn)它們的營養(yǎng)吸收。只有當(dāng)其他粕類單位蛋白成本遠(yuǎn)低于豆粕時(shí)，豆粕才有可能被替代。

2.菜粕菜籽中含有硫葡萄糖苷、芥酸、單寧、皂角苷等不良成分，其中主要是硫葡萄糖苷。硫葡萄糖苷本身無毒，但在一定溫度和水分條件下，經(jīng)過菜籽本身含有的芥子酶的酶解作用而產(chǎn)生異硫氰酸酯、唑烷硫酮和腈類等有害物質(zhì)。這些物質(zhì)可引起甲狀腺腫大，從而造成動(dòng)物生長速度下降，繁殖力減退。單寧則妨礙蛋白質(zhì)的消化，降低適口性。而芥酸阻撓脂肪代謝，造成心臟脂肪蓄積及生長受到抑制。。使用前需進(jìn)行一定的脫毒處理，并且使用時(shí)要加以限制，具體喂量應(yīng)根據(jù)菜粕中有害成分含量而定。經(jīng)過脫毒處理的菜籽粕喂量可以加大，而“雙低”油菜籽生產(chǎn)的菜粕喂量要受限制。同時(shí)，應(yīng)結(jié)合菜粕的氨基酸組成特點(diǎn)，適當(dāng)搭配其它餅粕。

3.棉籽中含有對動(dòng)物有害的棉酚及環(huán)丙烯脂肪酸，尤其是棉酚的危害很大。在制油過程中，由于蒸炒，壓榨等熱作用，大部分棉酚與蛋白質(zhì)、氨基酸結(jié)合而變成結(jié)合棉酚，結(jié)合棉酚在動(dòng)物消化道內(nèi)不被動(dòng)物吸收，故毒性很小。另一部分棉酚則以游離形式存在于餅、粕及油品中，這部分游離棉酚對動(dòng)物毒性較大，尤其單胃動(dòng)物過量攝取或攝取時(shí)間較長，可導(dǎo)致生長遲緩、繁殖性能及生產(chǎn)性能下降，甚至導(dǎo)致死亡。幼小動(dòng)物對棉酚的耐受能力更低。由于棉籽餅、粕中游離棉酚對動(dòng)物有害，因此，在使用棉餅、粕時(shí)，要根據(jù)飼喂對象及餅粕中游離棉酚的含量加以限量。反芻家畜在有優(yōu)質(zhì)粗料及多汁青料的情況下，棉籽餅、粕的用量不受限制，不會造成中毒。對單胃動(dòng)物要限制喂量，最好使用經(jīng)過脫毒處理的棉籽餅粕。同時(shí)，使用棉籽餅、粕配制飼糧要注意氨基酸平衡，尤其是棉籽餅、粕的賴氨酸含量低，且利用率差，應(yīng)注意添加賴氨酸。

發(fā)酵操作技術(shù)

發(fā)酵棉菜籽餅其實(shí)也是一個(gè)脫毒技術(shù)，具體操作如下：

1.仔細(xì)檢查棉菜籽餅，剔除棉菜籽餅中嚴(yán)重變質(zhì)發(fā)霉的部分，輕度發(fā)霉的原料可以忽略，因?yàn)槲⑸锇l(fā)酵能夠脫霉。

2.將棉菜籽餅粉碎并添加適量的玉米粉淀粉類的能量飼料等，調(diào)節(jié)飼料營養(yǎng)比例。

3.每噸棉菜籽餅加入2公斤食鹽、玉米粉（其它淀粉、面粉次粉等也可以，或者粉碎的生紅薯300公斤也可以）100公斤、“99多功能飼料發(fā)酵劑”1包（500g/包，市場售價(jià)約25元，以高濃度乳酸菌、酵母菌、復(fù)合酶制劑的專業(yè)發(fā)酵劑）。

4.在混合物料中添加適量水分，使混合物料含水量保持在55%左右，以“手抓一把并緊握，無水滴落，松手后輕觸即散”為宜，一般上述配方中需要加入清水約500-600公斤。

5.發(fā)酵方式根據(jù)實(shí)際環(huán)境條件各異，在桶、缸、塑料袋等容器中發(fā)酵均可。

6.發(fā)酵時(shí)要盡可能排盡空氣進(jìn)行密封發(fā)酵。如果使用的發(fā)酵容器有密封不嚴(yán)實(shí)的隱患，要在一開始就在其外層包裹一層塑料袋并扎緊。發(fā)酵過程中不能啟封。

7.發(fā)酵時(shí)間受環(huán)境溫度影響，通常夏季發(fā)酵2-3天，冬季發(fā)酵5-7天即可完成。發(fā)酵完成后，有較為強(qiáng)烈的酸香味，ph值在3-4。

規(guī)模運(yùn)用混合發(fā)酵現(xiàn)場

塑料缸、飼料袋（有內(nèi)膜）均可做發(fā)酵飼料

采用池子發(fā)酵

發(fā)酵完成的棉菜粕飼喂動(dòng)物技術(shù)

需要注意的是，發(fā)酵后的飼料酸度較低，不可以取代禽畜全部日糧。其他類發(fā)酵飼料同理。飼喂時(shí)根據(jù)不同情況，將發(fā)酵飼料按照一定比例添加到日糧中，發(fā)酵完成的棉菜粕為濕料，具體使用量每大概1.5-2公斤發(fā)酵棉菜粕（濕料）代替動(dòng)物日糧配方中1公斤豆粕的使用量進(jìn)行代替使用，與其它飼料混合后直接飼喂，由于棉菜籽粕蛋白較高，最高使用量不要超過禽畜日糧飼喂量的40%（濕料重量）。如果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵飼料過酸適口性變差，可在飼喂前在陽光下曬1-2小時(shí)，或添加適量的碳酸氫鈉（小蘇打）即可改善。

發(fā)酵過程中與發(fā)酵后使用過程中，發(fā)酵的容器要一直保持密封狀態(tài)，可以長時(shí)間保存（一年左右）。

當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)成本高居不下，而飼料成本是其中最高的，利用廉價(jià)原料發(fā)酵飼料（包括一些輕度發(fā)霉的粕類低價(jià)收回）是極佳解決辦法。通過微生物飼料發(fā)酵劑的發(fā)酵作用，可以將輕度霉變飼料變成優(yōu)質(zhì)飼料，將不易消化的物質(zhì)分解為可被畜禽吸收的小分子糖類、氨基酸等。同時(shí)發(fā)酵飼料中富含有益微生物、酶制劑、酸化劑等，可調(diào)節(jié)畜禽腸胃微生態(tài)環(huán)境并進(jìn)一步提高飼料利用率。發(fā)酵飼料氣味清香，提高了飼料的適口性，加上發(fā)酵飼料中有大約4℃的酒度，能夠促進(jìn)動(dòng)物新陳代謝促進(jìn)健康抵御疾病，是當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展中重要的一環(huán)。

本技術(shù)也可以同樣發(fā)酵菜籽粕（餅）、棕櫚粕等，方法同上。